Спирохеты в крови человека и животных

АТИПИЧНОЕ ПРОЯВЛЕНИЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ МОЖЕТ БЫТЬ ОБУСЛОВЛЕНО СПИРОХЕТАМИ
   Начиная с 1996 года при исследовании сывороток крови собак с явно выраженными клиническими признаками лептоспироза, отмечалась незначительная агглютинация с универсальным лептоспирозным антигеном. Дальнейшие исследования показали, что сыворотки дают реакцию микроагглютинации с лептоспирами Lep. icterohaemorrhagiae и Lep. sejroe (hebdomadis) в титрах 1:40 - 1:80, что ниже диагностического титра заболевания - 1:100 или выше. Кроме того, в реакциях микроагглютинации отмечалось отсутствие лизиса лептоспир, характерное для реакций с сыворотками больных лептоспирозом. Это позволяло давать отрицательное заключение по лептоспирозу. Показатели крови при данном заболевании: гемоглобин 180-230 г/л; эритроциты 8,5 - 9,5х10\12; лейкоциты 6,5 - 8,5х10\9; СОЭ 0 - 1 мм/час. В формуле крови: эозинофилы 2 - 8; палочкоядерные 2 - 25; сегментоядерные 25 - 45; лимфоциты 28 - 40; моноциты 11 - 14. Нейтрофилы часто имеют выраженную токсогенную зернистость. Билирубин, как правило, в норме или незначительно увеличен за счет фракции непрямого билирубина.Назначаемое лечение было мало эффективным, что часто приводило к гибели животных. Следует отметить, что подобная картина заболевания отмечалась как у собак привитых против лептоспироза отечественными или импортными вакцинами (Гексадог, Нобивак, Вангард, Гексаканивак и др.), так и не вакцинированных.
   При патологоанатомическом исследовании павших животных в сердечной мышце отмечались мелкие точечные кровоизлияния, в легких точечные кровоизлияния, селезенка темно-серого цвета, слегка увеличена, плотная, лимфатические узлы увеличены, печень увеличена, окрашена в бледно-коричневые тона, стенки кишечника гиперемированы, почки увеличены, отечны. Дальнейшие исследования были направлены на выяснение причин заболевания и гибели животных.
   Методами темнопольной и фазовоконтрастной микроскопии в сыворотках крови были обнаружены подвижные нитевидные микроорганизмы спиралевидной формы, совершающих вращательное, поступательное, волнообразное и сгибательное движение. Использование плазмы крови, вместо сыворотки, позволило легко находить данного возбудителя при исследовании методом темнопольной микроскопии. Размеры обнаруженных микроорганизмов - 0,1 - 0,5 х 5 - 30 мкм. Молодые особи обычно имеют размеры 0,3 - 0,5 х 5 - 10 мкм, с очень плотно завитой структурой. При большом увеличении выглядят как цепочки кокков или нитки жемчуга с утолщениями на концах, что характерно для лептоспир. Характер движения также соответствует движениям лептоспир. Более взрослые особи обычно тоньше 0,1 - 0,3 х 10 - 30 мкм. Микроорганизмы приобретают спиралевидную форму. Число завитков от 5 до 12. Движение приобретает волнообразный характер. В периферической крови людей, а также крови, взятой из сердца трупа, обнаруживали формы спирохет имеющих размеры до 200 мкм. По Романовскому-Гимзе окрашиваются с трудом (в течение 6 часов) в бледно-розовый цвет. Помимо особей, имеющих характерную для лептоспир и спирохет форму, были обнаружены L-формы и кольцевые формы. L-формы имеют вид крупных кокков, легко обнаруживаемых под микроскопом. Кольцевые формы имеют вид обручального кольца или перстня с маленьким камнем, направленным во внутрь кольца. Диаметр кольцевых форм 1 - 3 мкм. Кольцевые формы подвижны. Все формы постоянно присутствуют в крови. Плазма полученная из стерильно взятой крови выглядит как "проросшая".
   В период с 1997 по 2001 годы нами на предмет обнаружения спирохет исследована кровь 1465 собак, 118 кошек в возрасте от 2 месяцев до 16 лет, и кровь 184 человек обратившихся в клинику по тем или иным заболеваниям. Для работы использовали методы темнопольной или фазовоконтрастной микроскопии плазмы крови. Плазму получали смешиванием крови с 5% раствором цитрата натрия или 3 % раствором ЭДТА в соотношении 2 : 1. Форменные элементы отделяли центрифугирование при 70 g в течение 5 или 10 минут. Спирохеты сохраняли свою жизнеспособность при комнатной температуре 24 - 36 часов. Дополнительно ставили модифицированную серологическую реакцию Риккенберга - Брусина: 1 мл плазмы, полученной осветлением в течение 5 минут, центрифугировали при 10000 g в течение 15 минут. Каплю осадка (смесь спирохет и тромбоцитов) смешивали с каплей осветленной плазмы, полученной от животных или людей, у которых ранее были обнаружены спирохеты. Полученную смесь исследовали в темном поле. Спирохеты адсорбируются на тромбоциты и в течение 10 -15 минут теряют свою подвижность. При некоторых смешанных заболеваниях наблюдается спонтанная агглютинация спирохет на тромбоциты хозяина с потерей их подвижности. Такие тромбоциты в темном поле выглядят "паучками".
   У больных собирали анамнез, проводили общеклиническое исследование крови, определение белка, глюкозы, билирубина, активности аминотрансфераз (АлАТ, АсАТ). У животных дополнительно проводили исследования на обнаружение возбудителя чумы плотоядных в ИФА и иммуноцитохимическим методом, аденовирусов (CAV) в ИФА, возбудителя парвовирусного энтерита в РГА (кал) и РТГА, возбудителей пироплазмоза и гемобартенеллеза по наличию возбудителей в мазке крови, лептоспироза с универсальным лептоспирозными антигеном (ЛептоБАСА) НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи и в РМА.
   Частота выделения спирохет у собак составила 87,4 % (1281 животных), у кошек 45,8 % (54 животных), у людей 97,3 % (179 человек).
Оценка результатов лабораторных исследований групп животных (собаки) позволила выявить следующее:
   - чума плотоядных (Febris catarrhalis infectiosa canis), возбудитель Canine distemper morbillivirus, обнаружена у 254 животных. Спирохеты выявлены 247 (97,2 %). У 7 собак (не привитые щенки в возрасте 2 - 6 месяцев) заболевание протекало в острой форме с поражением центральной нервной системы. Щенки погибли на 2 -5 сутки заболевания. Спирохеты в этой группе заболевших выявлены не были. В другой группе (247 собак) все животные до возникновения заболевания были вакцинированы и ревакцинированы против чумы плотоядных по схемам, предлагаемым производителями вакцин. Причинами обращения в клинику были полный отказ от корма, лихорадочное состояние (температура тела колебалась от 39 до 41 оС), тяжелое дыхание, хрипы в легких, развивающийся фарингит и бронхит, серозные истечения из глаз, жажда, затрудненное мочеотделение. В крови: гемоглобин 180 - 210 г/л, количество эритроцитов 8,5 - 9,5 х 10\12, лейкоцитов 4,2 - 7,5 х 10\9, СОЭ 0 - 1 мм, белок 75 - 110 г/л, глюкоза 3,6 - 4,2 ммоль/л, билирубин общий 2,8 - 18,0 мкмоль/л, прямой билирубин 1,2 - 4,6 мкмоль/л, АлАТ 0,9 - 1,88 ммоль/ (л * ч), АсАТ 0,28 - 0,59 ммоль/ (л * ч). До проведения лабораторных исследований в этой группе животных в течение 5 - 7 дней проводилась интенсивная антибиотикотерапия против легочных заболеваний. По результатам лабораторных исследований 28 животных получали специфическое противовирусное лечение и антибиотикотерапию (цефалоспорины, пенициллины, макролиды и др.) по общепринятым схемам. Длительность лечения от 7 до 30 дней. Гибель животных с развивающимися признаками чумы плотоядных составила 60,7 %. Остальным животным, помимо специфического противовирусного лечения, назначали разработанный нами метод лечения-блокирования спирохет. Длительность лечения 5 - 7 дней. У животных обычно на 2 - 3 день температура тела нормализовалась, появлялся аппетит, животные чувствовали себя здоровыми. По окончании лечения показатели крови соответствовали норме, признаков осложнений и рецидивов не наблюдалось.
   - аденовироз собак (Adenovirosis cani), возбудитель Cani mastadenovirus, выявлен у 5 животных (2 щенка в возрасте 3 месяца и 3 кобеля в возрасте от 1 до 5 лет). Спирохеты обнаружены у 4 животных, которые ранее были вакцинированы против аденовироза; срок после вакцинации от 24 дней до 1 года. Причины обращения - высокая температура (до 41,5 оС), нарастающий кашель, серозные истечения из глаз и носа, у щенков - диарея. Двое животных, не смотря на предпринятое лечение, погибли от быстро развившегося отека легких (один щенок и кобель в возрасте 2,5 лет). Оба животных за три недели до заболевания были вакцинированы живыми поливалентными вакцинами. В крови обоих собак были обнаружены спирохеты. Остальным животным назначали сыворотку против аденовироза, а также терапию по методу блокирования спирохет. Улучшение состояния животных наступало на 7 -10 день.
   - пироплазмоз (кровепаразитарное заболевание, вызываемое Babesia canis) обнаружен у 276 животных. Болезнь характеризовалась резким подъемом температуры до 41,5 оС, гематурией, болезненным набуханием лимфатических узлов. Наряду с пироплазмами, в крови 164 собак обнаружены спирохеты. Лечение ацетуратом диминазина (веребен, беренил) или раствором азидина в течение 1 - 2 суток приводило к видимому улучшению состояния животных (появление аппетита, снижение температуры тела до нормальной, животные проявляли интерес к жизни). Однако, после перенесенного пироплазмоза, у животных с обнаруженными в крови спирохетами на 3 -5 день наступало резкое ухудшение состояния, несмотря на продолжающееся лечение иммуномодуляторами, витаминами и биостимуляторами. Количество эритроцитов, обычно сниженное при пироплазмозе в среднем на 30 %, снижалось в 8 -10 раз (0,6 -1,2 х 10\12) в следствие продолжающегося интенсивного гемолиза. Уровень гемоглобина понижался до 14 -27 г/л, а билирубина повышался до 200 - 600 мкмоль/л. Такие животные погибали на 8 -10 день заболевания. Блокирование спирохет на начальном этапе пироплазмоза сокращало продолжительность лечения и восстановительной терапии до 5 - 10 дней.
   - парвовирусный энтерит (Parvovirus enteritis canine), возбудитель Canine parvovirus, обнаружен у 18 животных (щенки в возрасте 1,5 - 9 месяцев, не привитые). Несмотря на предпринятое лечение, животные (6 щенков в возрасте 1,5 - 2,5 месяцев), у которых были обнаружены спирохеты, погибли в течение 5 - 6 дней от дегидротации, сердечной недостаточности и общего упадка сил. При этом температура тела понижалась до 35 оС. Лейкопения (количество лейкоцитов 0,6 - 1,5 х 10\9) отмечалась во всех случаях появления энтерита. У остальных 12 животных не обнаружено смешанной инфекции. Для лечения назначали введение противоэнтеритных иммуноглобулинов, изотонических растворов и антибиотикотерапию против секундарной микрофлоры.
   Острый энтерит наблюдался у 12 щенков возраста 2,5 и 3,5 месяцев. Серологические анализы в РГА и РТГА на парвовирусы давали отрицательные результаты. Длительность заболевания до обращения в клинику 3 - 5 дней. В этот период щенки лечились тетрациклином, амоксицикллином, противорвотными средствами и препаратами лактобактерий для восстановления микрофлоры кишечника. Клинические признаки: температура 38 - 39оС, рвота, понос серого цвета, вялость, отсутствие аппетита, жажда, вызванная дегидратацией организма. Анализы крови соответствовали нормальным показателям. В крови всех 12 щенков были обнаружены спирохеты. В анамнезе у владельцев животных за 2 - 3 недели до заболевания щенков отмечались непродолжительные диареи (1 - 2 дня) с общими признаками недомогания. Было высказано предположение, что заражение щенков могло быть вызвано ротавирусной инфекцией, носителями которой были владельцы животных. Блокирование спирохет и симптоматическое лечение быстро приводило к выздоровлению животных.
   - лабораторно диагноз лептоспироз был подтвержден в 52 случаях (Lep. icterohaemorrhagiae - 2, Lep. hebdomadis (sejroe) - 11, Lep. canicola - 39). Частота выделения спирохет у животных с подтвержденным диагнозом лептоспироз - 65,4 % (34 собаки). Несмотря на наличие антител (титр 1 : 200 и более), спирохеты обнаружены у животных зараженных лептоспирами всех выявленных нами серологических групп.
   Наибольшую группу обследуемых (848 собак) составили животные с быстро развивающейся болезнью неясной этиологии, характерными признаками которой были: быстрое "угасание" животного, почти полный отказ от корма, обильная рвота, затрудненное дыхание, понос лимонно-желтого или темно-оранжевого цвета со слизью и иногда со следами крови, обильная жажда. Температура тела в пределах 39 - 39,5оС. Первичный врачебный диагноз - отравление или пищевая токсикоинфекция. После 2 -5 дней интенсивного лечения и отсутствия положительных результатов назначали проведение анализа крови. В крови: гемоглобин 110 - 160 г/л, эритроциты 5,2 - 6,8 х 10\12, лейкоциты 4,8 -9,5 х 10\9, СОЭ 1 - 5 мм, белок 90 - 110 г/л, билирубин 4,6 - 12,4 мкмоль/л. Остальные показатели крови соответствовали норме. В формуле крови: базофилы 0 - 2; эозинофилы 1 -5; палочкоядерные 2 - 18; сегментоядерные 28 - 42; лимфоциты 35 - 45; моноциты 9 - 18. У большинства обследуемых животных нейтрофилы имели четко выраженную токсогенную зернистость и вакуолизацию цитоплазмы. Спирохеты обнаружены у 813 животных (95,9 %). Анализы крови и клинические данные позволили предположить наличие у животных коронавирусного энтерита, осложненного спирохетозной инфекцией. Симптоматическое лечение и блокирование спирохет приводили к исчезновению признаков заболевания на 3 - 8 день в зависимости от тяжести болезни.
   У кошек основными показаниями на направление крови для лабораторных исследований были гемобартенеллез (возбудитель Haemobartonella felis) и лептоспироз. У двух кошек лабораторно был подтвержден диагноз лептоспироз (Lep. pomona); Haemobartonella обнаружены в 43 случаях. В крови 54 животных были обнаружены спирохеты (45,8 %).
   Возрастных и породных отличий в инфицированности животных спирохетами обнаружено не было. Несмотря на лечение традиционными или принятым у нас методами и улучшение состояния животных до нормального, спирохеты на элиминировались из крови и обнаруживались в течение 5 и более лет (срок наблюдения).
   Наряду с животными была обследована кровь 94 женщин и 82 мужчин в возрасте от 25 до 62 лет и 8 детей (девочки в возрасте от 3 до 15 лет). Причины обращения - длительное и неоднократное лечение от пневмонии, возможного и неподтвержденного туберкулеза или сифилиса, гепатита, лихорадок неясного генеза, кожных аллергических заболеваний, постоянной субфибрильной температуры, быстрой утомляемости и болей в суставах. Основные показатели крови (гемоглобин, количество эритроцитов и лейкоцитов, СОЭ) соответствовали норме. В формуле крови отмечалось двух - трех кратное увеличение количества моноцитов (до 19, в среднем 11). Во всех случаях при обнаружении спирохет отмечалась токсическая зернистость нейтрофилов. Из биохимических показателей отмечено незначительное увеличение общего билирубина до 20 - 25 мкмоль/л и снижение уровня глюкозы до 2,4 - 3,6 ммоль/л (по Хагедорну-Йенсену). Активность аминотрансфераз (АлАТ и АсАТ) соответствовала нормальным показателям крови здоровых людей. Содержание общего белка - 75 - 90 г/л; альбуминов,альфа1, альфа2, бета и гамма-глобулинов соответственно 46 - 48; 2,3 - 4,5; 5,3 - 8,1; 6,8 - 9,0; 14,6 - 20,4 г/л.
   Спирохеты обнаружены у 179 человек (97,3 %). 118 человек прошли обследование не различные формы сифилиса. При этом, несмотря на наличие спирохет в крови, РИФ-абс, КСР, РПГА, ИФА, РИБТ и другие реакции были отрицательными. Также были отрицательными реакции на лептоспироз (с универсальным лептоспирозным антигеном и в ИФА). В этой группе, несмотря на лечение в стационарах и амбулаторное лечение, в том числе и от бореллиозов (болезни Лайма), спирохеты обнаруживали в крови в течение 5 и более лет (срок наблюдения), что позволяет сделать вывод о том, что данный вид спирохет в отличие от трепонем, лептоспир и бореллий, не элиминируется из крови человека.
   В 2002 году на наличие спирохет нами были обследованы сыворотки крови 520 человек, поступившие из стационаров и поликлиник г. Ростова-на-Дону и Ростовской области для проведения исследования на лептоспироз. Возраст больных от 3 до 65 лет. Показания к направлению на исследование:
   - вирусный гепатит - 332. Спирохеты обнаружены в сыворотках крови 285 человек (85,8 %);
   - менингит - 48. Спирохеты обнаружены в 31 случае (64,6 %);
   - лептоспироз - 53. Спирохеты обнаружены в 38 случаях (71,7 %);
   - лихорадки неясного генеза, неизвестный ОРВИ - 87. Спирохеты обнаружены в 65 случаях (74,7 %).
   Результаты выборочного исследования сывороток на болезнь Лайма в РИФ (антиген B. burgdorferi) были отрицательными.
   Спирохеты не образуют экзотоксинов. Образующиеся во время из гибели эндотоксины (лизины, агглютинины и др.), по-видимому, менее выражены, чем при сифилисе или бореллиозах, что обусловливает отсутствие клинических признаков в начале заболевания или латентный период. Наличие в крови антител при спирохетозе не отражает защитного состояния организма. Напротив, антитела адсорбируясь на поверхности спирохет создают новые антигенные детерминанты, способствующие выработке антиидиотипических, анти-антиидиотипических и т. д. антител, которые образуют между собой разнообразные иммунные комплексы. Последние связываются на поверхности клеток с гликопротеином Fо парамиксовирусов и комплементом. В результате этого происходит освобождение комплексов вирусный антиген-антитело с клеточной поверхности, а также отменяется подавление внутриклеточного синтеза некоторых вирусных белков. Молекулы Fо на поверхности клетки подвергаются протеолитической активации и индуцируют слияние клеточных мембран. Такой тип вирус-индуцированного слияния, называемый слиянием изнутри, позволяет реплицирующимуся и транскрибирующимуся вирусу распространяться из клетки в клетку, успешно избегая действия циркулирующих противовирусных антител. Подобные взаимодействия описаны для ряда представителей родов Pneumovirus, Morbillivirus, Coronavirus. Этим, по-видимому, обусловлен наблюдаемый нами процесс активации вируса чумы плотоядных (Canine distemper morbillivirus) у вакцинированных животных и отсутствие эффективности лечения при введении противовирусных антител.
   Обладая высокой подвижностью, спирохеты покидают кровяное русло выходят на поверхности слизистых легких, кишечника и др. Подвергаясь воздействию IgA, адсорбируют на своей поверхности эти иммуноглобулины, а также их комплексы с вирусами, в частности с парамиксовирусами и коронавирусами. Возвращаясь обратно в кровь, спирохеты осуществляют пассивное транспортирование вирусов к клеткам мишеням. Циркулирующие комплексы антитело-анти-антитело-комплемент к некоторым антигенным детерминантам спирохет адсорбируясь на клеточной мембране активируют расщепление гликопротеина Е2 коронавируса или Fо парамиксовируса протеазами клетки хозяина, индуцируя вирус к проникновению в клетку, а также способность вируса вызывать слияние клеток. Некоторые особенности клеток, включая вариации D-локуса аллелей главного комплекса тканевой совместимости (HLA-DR), могут также обусловить разнообразное проявление заболевания, а также способствовать инфицированию вирусными агентами. Связь наличия того или иного гена системы HLA с повышенной чувствительностью к вирусным агентам может быть также обусловлена и тем, что в ее пределах локализованы гены, контролирующие синтез некоторых компонентов комплимента. Кроме того, лица несущие антиген В7 в HLA-B, характеризуются иммунологической дефектностью в отношении ряда вирусных заболеваний в силу того, что ген В7 сцеплен с Ir-геном, контролирующим силу иммунного ответа. При этом вирус не элиминируется из организма, а обеспечивает возникновение латентной вирусной инфекции с повреждением тканей и появлением антител (аутоантител) против "вскрытых" в результате инфекционного процесса аутоантигенов. Это приводит к возникновению различных атипичных форм проявления инфекционного процесса. У больных со смешенной инфекцией (спирохетемией) также оказывается неэффективным лечение, направленное на подавление вирусной репликации либо введением антител или других противовирусных препаратов. Напротив, подавление образования комплексов антител спирохет ведет к быстрому прекращению развития заболевания и выздоровлению.
   Проведенное исследование показало очень высокий процент (84,9 %) заболевания людей, связанного со спирохетами. Тяжесть заболевания варьирует от легкого недомогания и быстрой утомляемости до дессименированного - с лихорадкой, кожными аллергическими реакциями, поражениями легких, кишечника и других внутренних органов, осложнениями сердечно-сосудистой системы, суставов и нервной системы.
   В заключение считаем необходимым отметить, что современная диагностика заболеваний, основанная на специфических серологических реакциях и ПЦР к уже хорошо известным возбудителям и их постоянным антигенным детерминантам, позволяет решить многие проблемы. Между тем применение анализа сывороток (плазмы) крови темнопольной или фазовоконтрастной микроскопией позволило выявить возбудителя (спирохету) у значительного числа больных с различными атипичными формами проявления заболеваний. Это ставит новую задачу по изучению ее влияния на организм, разработку методов диагностики и лечения, а также предупреждения ее распространения среди населения. Цель данной публикации привлечь внимание специалистов различных отраслей медицины к возникающей проблеме спирохетозов и атипичных проявлений заболеваний человека и животных.